尺寸排阻色譜柱是一種廣泛應(yīng)用于生物分析領(lǐng)域的工具,其工作原理主要基于分子大小差異進(jìn)行分離。利用柱內(nèi)固定相中孔隙與分子間的物理作用來(lái)實(shí)現(xiàn)分離。具體來(lái)說(shuō),聚合物分子在柱子中的孔道中被篩選,較大的分子無(wú)法通過(guò)尺寸較小的孔道,只有較小的分子才能通過(guò)這些孔道,從而實(shí)現(xiàn)不同分子尺寸的分離。其優(yōu)點(diǎn)在于其分離速度快、操作簡(jiǎn)單、分離效果好。此外,該技術(shù)不依賴于分子之間的親和性或化學(xué)性質(zhì),因此適用于各種生物大分子,如蛋白質(zhì)、多肽和核酸等的分離。
尺寸排阻色譜柱的安裝過(guò)程:
1、連接入口端:將色譜柱的入口端與液相色譜儀的泵出口管道牢固連接,一般采用不銹鋼管或聚醚醚酮(PEEK)管。連接時(shí)要確保管道插入色譜柱入口端足夠的深度,并使用合適的扳手?jǐn)Q緊接頭,防止泄漏,但注意避免過(guò)度用力擰緊而損壞色譜柱入口端的連接部件??梢栽诮宇^處適當(dāng)涂抹密封脂增強(qiáng)密封效果。
2、安裝柱頭過(guò)濾器:在色譜柱入口處安裝柱頭過(guò)濾器,其作用是防止樣品中的顆粒雜質(zhì)進(jìn)入色譜柱造成堵塞。將柱頭過(guò)濾器放置在色譜柱入口端,通過(guò)螺紋連接或卡套連接等方式固定在色譜柱上,確保安裝方向正確且與色譜柱入口緊密貼合,防止出現(xiàn)死體積過(guò)大的情況。
3、連接出口端:把色譜柱的出口端與檢測(cè)器的流通池入口連接起來(lái),同樣使用合適的管道并保證連接牢固且無(wú)泄漏。連接完成后,將柱尾螺母擰緊在色譜柱出口端以確保密封良好。注意不要讓任何雜質(zhì)進(jìn)入色譜柱內(nèi)部。
4、調(diào)整色譜柱位置:根據(jù)液相色譜儀的結(jié)構(gòu)和使用要求,將安裝好色譜柱的流路部分放置在合適的位置。如果有溫控要求的色譜柱,需將其安裝在溫度控制器相應(yīng)的位置,確保色譜柱能在設(shè)定溫度下工作。調(diào)整時(shí)要避免對(duì)色譜柱造成碰撞或施加過(guò)大外力,防止破壞其內(nèi)部填料結(jié)構(gòu)。